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轉基因元件SSU啟動子LAMP試劑盒

轉基因元件SSU啟動子LAMP試劑盒

產品時間:2020-08-05

訪問量:922

廠商性質:經銷商

生產地址:進口、國產

簡要描述:
轉基因元件SSU啟動子LAMP試劑盒低溫運輸,-20℃保存,保存期限為12個月。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨放置。本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供DN段作為陽性對照。
品牌其他品牌CAS詳見說明書
分子式詳見說明書純度詳見說明書
分子量詳見說明書貨號GOYP63869
規格50次供貨周期現貨
主要用途公司產品僅用于科研應用領域化工
產品名稱 轉基因元件SSU啟動子LAMP試劑盒
英文名稱 Lamp kit for transgenic element SSU promoter
規格 50次

 

產品優勢:
1.隨時可用。
2.優化的緩沖液可增強特異性并減少引物二聚體的形成。
3.高靈敏度,特異性和可靠性。
4.為不同的qPCR儀器提供了被動參考染料。

使用方法:
產品僅用于科研一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
轉基因元件SSU啟動子LAMP試劑盒2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。

PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

LAMP3 Others Cynomolgus 食蟹猴 LAMP3 / DC-LAMP 人細胞裂解液 (陽性對照) 吡哌酸(標準品)Pipemidic acid質量規格:供檢查用

豹貓肺成纖維樣細胞;LCL3鹽酸氟奮乃靜(標準品)FLUPHENAZINE HYDROCHLORIDE質量規格:供HPLC法含量測定用

SPC-A1細胞,人肺腺癌細胞 綠猴腎細胞,Vero細胞 CM-M034小鼠肝動脈內皮細胞*培養基100mL鴉膽子苦醇(標準品)(+)-Brusatol質量規格:HPLC>98%,標準品

Sf-9(昆蟲細胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸哌唑嗪(標準品)Prazosin HCl質量規格:含量測定

NHEK.f-c 正常人表皮角質形成細胞(NHEK)少年,單一來源 500,000cells 原代神經膠質細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml7-羥基7-Hydroxycoumarin質量規格:≥97%,BR

16HBE細胞,人支氣管上皮細胞 化學轉化小鼠鼻咽上皮細胞,TMNE細胞 CL-0178OVCAR-3(人卵巢癌細胞)5×106cells/瓶×2酸鉀shēng huà shì jì容量:1

U-87 MG(人神經膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×22,3-二基丁烷 標準品 2,3-DIMqTHYLBUTcNq 1979/9/8

HVMF-c 人類絨毛間質成纖維細胞(HVMF) 500,000cells 腎系膜細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)碳酸銅shēng huà shì jì容量:RT5

成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)dNTPMIX100mMSOLUTIONpH7.0dNTP混合溶液,100 mM , pH 7.0超級40 M897

PRELP Others Human PRELP 人細胞裂解液 (陽性對照) 5680-80-8L-絲酸鹽酸鹽L-Serine metxyl ester xy7nochloride

小鼠小腦星形膠質細胞MA-cL-天冬素一水,英文名或英文縮寫:L-Asparagine Monohydrate,級別:BR,99%,規格:10

G-7細胞,小鼠骨骼肌肌肉母瘤細胞 人腎癌細胞,GRC-1細胞 人小氣道上皮細胞HSAEpiC3--1-炳醇 98% 3-Chloro-1-propcnol 67-30-2

小耳豬腎細胞;SEPfkRIBOZOLME(MICROENRICHED)RIBOZOL ME粉色至深粉色透明液體RTsigma

OPCML Others Human OPCML 人細胞裂解液 (陽性對照) L(+)-2-基,英文名或英文縮寫:L-2-Aminobutyric acid,級別:BR,98.5%,規格:25

CM-R100大鼠腦動脈血管內皮細胞*培養基100mL132-53-62-亞硝基-1-;β-亞硝基-α-2-nitnoso-1-naphthol;1,2-Naphthoinoneone-2-oxiMe;1,2-NaphthoinoneoneiMine-2-oxiMe;C.I. 10010

NBL1 Others Human DAN 人細胞裂解液 (陽性對照) 尼群地平Nitrendipine質量規格:>98%,BR

人整合SV40基因的上皮細胞;HBL-100 [HBL100]尼群地平(標準品)Nitrendipine質量規格:含量測定

CD7 Others Rat 大鼠 CD7 人細胞裂解液 (陽性對照) 華蟾毒它靈;華蟾素(標準品)Cinobufotalin質量規格:HPLC98%,標準品

人腎小球內皮細胞*培養基 100mL維甲酰酚胺Fenretinide(4-HPR)質量規格:>98%,BR

EL4.IL-2細胞,小鼠瘤細胞 Mo-MuLv/3T3(Mo-MuLv感染的3T3細胞) 人皮膚成纖維樣細胞;HSF22-氨基嘌呤,異腺嘌呤;異腺素;2-AP2-Aminopurine質量規格:>98%,BR

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